●考点 临床标本微生物学检验（血液、脑脊液、痰、尿液、粪便、性传播疾病、创伤） （1）常见病原菌 （2）标本采集及运送 （3）检验方法 （4）临床意义
（二）标本采集 1.采血时间和频率 ◆病人发热初期或高峰期采集，或在未用抗生素前采集。但怀疑细菌性心内膜炎时，血培养不少于三次。 2.采血量 ◆一般为静脉采血，成人采血量10～20ml，儿童3～5ml，婴儿1～2ml。 3.床边直接注入血液培养基，否则用SPS抗凝剂送检，不得用EDTA，枸橼酸钠抗凝。 4.检查血管内导管有无细菌污染，可无菌操作，剪下导管5cm远侧段，置无菌容器内送检。 （三）微生物分离培养和鉴定 1.培养基的选择 ◆用自动血培养分析仪时选用相应的血培养瓶，如需氧＋厌氧，需氧＋高渗等。 2.分离和鉴定 当观察有细菌生长时或血培养仪阳性报警时，应及时作如下检验： ◆（1）涂片染色镜检，结果及时与临床联系； ◆（2）转种血平板、巧克力平板、厌氧血平板或其他特殊培养基等分离培养纯菌再进行鉴定； ◆（3）同时做药敏试验，结果及时报告临床作治疗参考。 （四）报告方式 阴性结果： ◆7d报告无细菌生长。 ◆疑为亚急性细菌性心内膜炎、布鲁菌病、厌氧菌血症、真菌血症时，血培养至少连续培养2～3周，仍无细菌生长者可报告为阴性。 阳性结果——三级报告方式： ◆第一级报告告知标本已出现阳性并报告直接细菌涂片结果，同时做初步药敏试验； ◆第二级是报告初步药敏结果，同时做正式鉴定和药敏试验； ◆第三级报告正式鉴定和药敏试验结果。 （五）临床意义 ◆葡萄球菌菌血症常由疖、痈、脓肿及烧伤创面等原发感染灶继发，也可由呼吸道感染引起。 ◆G-菌主要侵犯危及机体免疫功能低下的病人，耐药菌株不断增加。 ◆厌氧菌的菌血症常合并需氧菌感染，临床症状较重而复杂。 ◆L型菌的菌血症主要由于使用抑制细菌细胞壁合成的抗生素后，由缺损细胞壁的细菌感染所致。 ◆免疫低下者常出现真菌菌血症。 ◆院内感染菌血症不断上升。
结核菌接种罗-琴培养基或米氏7H10培养基。真菌培养接种沙氏培养基。病毒培养常用动物接种、鸡胚接种、细胞培养。 3.血清学检测可直接检测抗原。 （四）临床意义 ◆细菌性脑膜炎是中枢神经系统感染的常见类型。 ◆真菌性脑膜炎最常见于隐球菌脑膜炎，其他的真菌性脑膜炎如白假丝酵母、球孢子性脑膜炎日渐增多，特别是免疫功能低下和恶性疾病患者易发。 ◆流行性乙型脑炎可获得持久免疫力，再次发病者极少见。 ◆肠道病毒对中枢神经系统的危害性逐渐引起人们的 四、呼吸道感染 呼吸道按解剖结构分为上呼吸道和下呼吸道。 ◆上呼吸道感染主要指喉及喉以上的呼吸道感染。 ◆下呼吸道感染主要指气管、支气管和肺的感染。 （一）上呼吸道的正常菌群 1.球菌 凝固酶阴性葡萄球菌，链球菌，微球菌，奈瑟菌，厌氧球菌。 2.杆菌 棒状杆菌，嗜血杆菌，类杆菌，梭杆菌。
（四）检验方法 1.涂片： ◆检查细菌常用革兰染色、抗酸染色； ◆检查隐球菌采用墨汁染色； ◆军团菌、支原体、病毒等可用免疫荧光抗体染色。 ◆合格的痰标本： 白细胞＞25个/低倍视野，鳞状上皮细胞＜10个/低倍视野。 2.分离培养 （1）痰标本的前处理一般是用无菌生理盐水将痰洗净，再加入胰酶溶液使痰均质化。 （2）普通细菌培养采用血平板、中国蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板、巧克力平板。 （五）临床意义 ◆注意采集合格的下呼吸道标本，以提高检出率和阳性的正确率。 ◆一些条件致医院内肺炎的主要致病菌。 ◆真菌性肺炎多为条件致病性真菌感染，常见的以白假丝酵母菌为主。
3.注意事项 ◆严格进行无菌操作，尽量避免污染菌，立即送检，不超过1h，尿中不得加任何防腐剂和消毒剂。 （三）分离培养 1.培养基的选择 ◆普通细菌选用血平板、中国蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板。特殊细菌使用特殊、选择培养基。 2.尿细菌定量培养。 （四）结果报告 1.阴性 一般48h无细菌生长。 2.阳性 菌落计数、鉴定及药敏结果。 ◆G-杆菌＞cfu/ml；G+球菌＞cfu/ml，有诊断意义。 ◆G+球菌＜cfu/ml，多为污染；G+球菌～cfu/ml，可疑阳性。 3.尿路感染的细菌数少于CFU／ml时多见于以下几种情况： ◆应用抗菌药物，尿中细菌发育受到抑制； ◆使用低敏感性药物，大多数细菌停留在CFU／ml； ◆尿浓度变化大时及pH在5.0以下8.5以上，则发育受阻； ◆尿频时； ◆病原菌发育要求条件高时； ◆采尿时外阴部消毒剂混入尿中。 六、消化道感染 （一）常见病原菌 ◆肠毒素为主的病原菌： 金葡，霍乱弧菌，志贺菌，ETEC/EHEC/EAggEC，产气荚膜梭菌，艰难梭菌 ◆侵袭性为主的病原菌： 沙门菌，志贺菌，EPEC/EIEC，小肠结肠炎耶尔森菌，副溶血弧菌，结核分枝杆菌，白假丝酵母菌 ◆病毒：轮状病毒，埃克病毒，Norwalk病毒，腺病毒 （二）标本采集与运送 1.采集时间 急性期、尽量在用药前采集。 2.采集方法 ◆自然排便采集法、直肠拭子。 ◆标本不能及时接种时，应在标本中加保护剂或用相应的运输培养基。 （三）分离培养 培养基的选择： ◆普通致病菌如沙门菌、志贺菌等可选用SS琼脂平板、中国蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板。 ◆特殊细菌如弯曲菌、弧菌、厌氧菌等选择相应的选择性培养基。 ◆病毒可用细胞培养。 （四）临床意义 ◆感染性腹泻由多种病原体感染所致。 ◆消化性溃疡由幽门螺杆菌感染引起。 ◆轮状病毒常引起幼儿腹泻，腺病毒是引起儿童腹泻的主要病原，还可引起成人腹泻，埃可病毒常引起婴幼儿腹泻，Norwalk病毒常感染成人和大龄儿童。
（三）临床意义 ◆由创伤、手术、侵入性器械操作等外科治疗引起的感染最为常见。 ◆感染以化脓性炎症改变为主。外伤性创伤感染以葡萄球菌和链球菌多见。 ◆深部创伤易引起破伤风和气性坏疽。 ◆烧伤创面以革兰阴性杆菌最常见，次为革兰阳性球菌感染。 ◆急性化脓性骨关节炎常由金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌感染所致。 ◆慢性化脓性骨关节炎、慢性骨髓炎常由结核分枝杆菌引起，葡萄球菌、链球菌也常见。
本章小结：
临床标本微生物学检验 包括：血液、脑脊液、痰、尿液、粪便、性传播疾病、创伤
小试牛刀
一、A1
1、可引起中枢神经系统感染的真核细胞型微生物是（ ）。
A、狂犬病病毒
B、新型隐球菌
C、乙型脑炎病毒
D、脑膜炎奈瑟菌
E、脊髓灰质炎病毒
B
新型隐球菌广泛分布于自然界，也可存在于人体体表、口腔和肠道中。其感染属外源性感染。可经呼吸道侵入人体，由血流播散至脑及脑膜，也可侵犯皮肤、骨和关节。
2、对于血培养瓶，如无细菌生长痕迹，应在几天后发出报告（ ）。
A、7天
B、5天
C、8天
D、9天
E、6天
A
阴性结果时应7天报告无细菌生长。疑为亚急性细菌性心内膜炎、布鲁菌病、厌氧菌血症、真菌血症时，血培养至少连续培养2～3周，仍无细菌生长者可报告为阴性。
3、尿细菌培养结果诊断错误的是（ ）。
A、阴性：一般细菌——48h无细菌生长
B、革兰阴性杆菌cfu/ml有诊断意义
C、革兰阳性球菌cfu/ml有诊断意义
D、革兰阳性球菌cfu/ml，多为污染
E、革兰阳性球菌～cfu/ml，可疑阳性
B
1.阴性 一般细菌——48h无细菌生长。2.阳性 菌落计数、鉴定及药敏结果。革兰阴性杆菌cfu/ml；革兰阳性球菌cfu/ml，有诊断意义。革兰阳性球菌cfu/ml，多为污染。革兰阳性球菌～cfu/ml，可疑阳性。
4、常用下列哪种方法采集尿标本作细菌培养（ ）。
A、清洁头段尿
B、清洁中段尿
C、留24小时尿
D、导尿
E、膀胱穿刺
B
常采用清洁中段尿做尿路感染的标本。
5、为了确定泌尿系统的感染，取中段尿进行细菌计数时具有诊断意义的细菌数是（ ）。
A、革兰阴性杆菌＞cfu/ml革兰阳性球菌＞cfu/ml
B、革兰阴性杆菌＞cfu/ml革兰阳性球菌＞cfu/ml
C、革兰阴性杆菌＞cfu/ml革兰阳性球菌＞cfu/ml
D、革兰阴性杆菌＞cfu/ml革兰阳性球菌＞cfu/ml
E、革兰阴性杆菌＞cfu/ml革兰阳性球菌＞cfu/ml
D
尿路感染时尿标本的采集方法：采用清洁中段尿，使用肾盂尿采集法；膀胱穿刺法；导尿法。鉴定结果：革兰阴性杆菌＞cfu/ml；革兰阳性球菌＞cfu/ml，有诊断意义。
6、衣氏放线菌引起的感染类型属于（ ）。
A、急性感染
B、隐性感染
C、外源性感染
D、内源性感染
E、接触感染
D
放线菌多引起内源性感染。
7、真菌性脑膜炎常见病原菌是（ ）。
A、新生隐球菌
B、白假丝酵母菌
C、曲霉菌
D、毛霉菌
E、球孢子菌
A
隐球菌病好发于免疫功能低下者，特别是隐球菌性脑膜炎，常在系统性红斑狼疮、白血病、淋巴瘤、艾滋病等疾病患者中发生。
8、以下为合格痰标本指标，除外是（ ）。
A、脓细胞较多
B、柱状上皮细胞较多
C、鳞状上皮细胞较多（＞10个/低倍镜视野）
D、白细胞较多（＞25个/低倍镜视野）
E、痰培养细菌浓度应≥cfu/ml
C
合格的痰标本应是含白细胞、脓细胞和支气管柱状上皮细胞较多，而受污染的痰标本则是来自颊黏膜的扁平上皮细胞较多。以白细胞＞25个/低倍视野，而鳞状上皮细胞＜10个/低倍视野为合格标本。
9、血培养的培养基中常用的抗凝剂为（ ）。
A、EDTA－K2
B、肝素
C、聚茴香脑磺酸钠（SPS）
D、枸橼酸钠
E、EDTA－K3
C
床边直接注入血液培养基，否则用SPS抗凝剂送检，不得用EDTA或枸橼酸钠抗凝。
二、A2
1、某患者因尿频，尿急，尿痛，而就诊，临床采集的标本，用1μl定量接种环接种在培养基上，孵育后经鉴定为大肠埃希菌，菌落数，应大于多少才能诊断尿路感染（ ）。
A、20
B、50
C、75
D、
E、
D
革兰阴性菌应大于cfu/ml才能诊断尿路感染。
2、尿路感染患者应用抗菌药物后、尿pH高于8.5或低于5.0、尿频均可使尿中细菌数量（ ）。
A、增多
B、减少
C、不变
D、细菌种类增多
E、细菌种类减少
B
应用抗菌药物、尿pH值过高，过低，尿频可使尿中细菌数量减少。
三、B
1、A.梅毒B.淋病C.软下疳D.性病淋巴肉芽肿（LGV）E.非淋菌性尿道炎
1、杜克嗜血杆菌可导致的疾病为（ ）。
A、
B、
C、
D、
E、
C
软下疳是由杜克嗜血杆菌感染引起。
2、淋病奈瑟菌可导致的疾病为（ ）。
A、
B、
C、
D、
E、
B
淋病是由淋病奈瑟菌感染引起。
3、解脲脲原体可导致的疾病为（ ）。
A、
B、
C、
D、
E、
E
解脲脲原体在特定的环境下可以致病。主要通过性行为传播，是非淋菌性尿道炎的主要病原体之一。
4、梅毒螺旋体可导致的疾病为（ ）。
A、
B、
C、
D、
E、
A
梅毒是由梅毒螺旋体感染引起。
5、沙眼衣原体沙眼生物变种可导致的疾病为（ ）。
A、
B、
C、
D、
E、
E
非淋菌性尿道炎、阴道炎、宫颈炎、前列腺炎、附睾炎、直肠炎等主要由沙眼衣原体沙眼生物亚种、支原体等感染引起。
6、沙眼衣原体LGV生物变种可导致的疾病为（ ）。
A、
B、
C、
D、
E、
D
性病淋巴肉芽肿是由沙眼衣原体性病淋巴肉芽肿生物亚种所致，主要经性接触传播，主要侵犯淋巴组织。
2、A.百日咳鲍特菌B.流感嗜血杆菌C.军团菌D.铜绿假单胞菌E.幽门螺杆菌
1、与金黄色葡萄球菌在血平板上共同孵育时，可形成“卫星现象”的细菌是（ ）。
A、
B、
C、
D、
E、
B
当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上共同培养时，由于后者能合成较多的Ⅴ因子，可促进流感嗜血杆菌的生长。因此，在葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大，离葡萄球菌菌落越远的菌落越小，此称为卫星现象，这有助于对流感嗜血杆菌的鉴定。
2、引起胃溃疡的主要细菌是（ ）。
A、
B、
C、
D、
E、
E
消化性溃疡由幽门螺杆菌感染引起。
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