结核性脑膜炎（简称结脑）是结核病中受结核杆菌破坏最严重的形式之一，常导致高致残率及死亡率。故早期诊断并及时给予抗痨药物治疗对于改善结脑的预后至关重要。但是至今临床上仍然缺乏有效的诊断方法[1]，这就严重影响了结脑患者的治疗及预后，同时制约了实验室对结脑的更进一步研究。现有的方法中，脑脊液(cerebrospinalfluid,CSF)结核杆菌培养耗时长、需要的脑脊液量大、检测阳性率很低[2-3]。脑脊液结核杆菌PCR虽然是一种快速敏感性高的检测方法，但假阳性率高是这种检测方法尚无广泛应用于临床的重要原因。脑脊液涂片找抗酸杆菌（acid-fastbacilli，AFB）仍是目前用于诊断结脑最常用的的一种简便迅速方法，但传统的抗酸染色法(Ziehl-Neelsenstain,Z-N)阳性率极低，据报道国内外传统抗酸染色阳性率在10%左右[4-5]。所以，现在急需一种能从少量脑脊液中快速、高敏感的找到结核分枝杆菌的方法，为临床结脑诊治及结脑实验研究提供依据，因此我们将人份脑脊液涂片进行改良抗酸染色法，对镜检结果进行分析，探讨改良的抗酸染色法对结脑诊断及治疗中的价值。
1、资料和方法
1.1研究对象
收集年5月至年10月医院神经内科收治的50例临床怀疑为中枢神经系统感染的患者，共人份脑脊液。50例患者中，男31例，女19例，年龄18~81岁，平均（35±6）岁。就诊离发病时间1～56d，7d以内就诊的有14例；7～30d的有27例；＞30d就诊的有9例。入院后50例患者均严格按照临床诊断标准进行规范诊治。结脑组临床诊断标准参考Ahuja等[6-7]临床诊断标准：①临床表现有发热、头痛、呕吐，持续时间大于5d，脑膜刺激征或伴有局灶性神经损害，伴或不伴结核感染的全身中毒症状；②脑脊液检查显示细胞数增加(10~/μL)，淋巴细胞比例＞50%，蛋白＞1g/L，葡萄糖＜血糖的50%（即＜2.2mmol/L），阿利新兰染色未见隐球菌及细菌培养阴性；③头颅CT或MRI检查存在脑基底池渗出、脑积水、梗死灶或结核瘤等表现；④存在颅外结核如肺结核；⑤除外其他神经科疾病。满足以上①⑤和②③④中任意两项即可诊断为结脑。非结脑组诊断标准参考人民卫生出版社第五版《神经病学》，其中包括脑膜白血病、化脓性脑膜炎及脑膜癌病。
1.2方法
用改良抗酸染色法[8]对所有结脑患者的脑脊液涂片进行染色，即细胞离心机（ShandonCytospin,Therm-4,英国）进行集菌、4%多聚甲醛固定、TritonX-破膜、用传统抗酸染色剂(天和，杭州)进行染色、最后用光学显微镜（OLYMPUS-BX41,日本）进行镜检。阅片结果完全按照国际上公认的修改后的国家结核病公职规划(RNTCP)指南进行统计，将镜检结果共划分为5个等级：-即个视野内未见AFB；±即个视野内可见1-10条AFB；+即个视野内可见10-条AFB；++即每个视野内可见1-10条AFB；+++即每个视野内可见大于10条AFB。我们将结果为＜（+）者均定为抗酸染色阴性。
1.3．统计学方法
采用SPSS13.0对数据进行分析，计量资料表示用x±s，两组间率的比较用χ2检验，两组计量资料均数的比较用t检验，检验水准为α=0.05有统计学意义。
2结果
2.1临床资料
按Ahuja等[9]临床诊断标准，诊断为结脑者35例，非结脑者15例，其中脑膜白血病5例，新型隐球菌性脑膜炎5例，化脓性脑膜炎5例。诊断为结脑的患者均给予规律的3~5联抗结核治疗。35例患者经抗结核治疗后34例（97.14%）症状和体征有不同程度的好转，其中症状明显好转者26例（74.29%），出院后基本无明显神经系统阳性体征；症状改善者8例（22.86%），出院后仍遗留有不同程度神经系统体征；死亡1例（2.86%），死于结脑的并发症(脑疝)。
2.2改良抗酸染色结果：
光镜下，抗酸杆菌呈散在、并列或成堆分布，治疗前或治疗初的形态多为细长略弯曲、线条柔；治疗后菌体变为粗短杆状、大小颗粒，线条不再柔和。抗酸杆菌多为胞外菌，也可见大量胞内抗酸杆菌，吞噬菌体的细胞主要为中性粒细胞，也可见到淋巴及单核细胞，胞内菌多为粗短杆状菌，少数菌形态为细长略弯曲（图1）。
35例结脑患者中，首次腰穿改良抗酸染色阳性者共31人，占88.57%。结脑组及非结脑组患者抗酸染色结果见表1。细胞内抗酸染色检测结果见表2。
在抗酸结果为（+++）的6人中5例脑脊液中性粒细胞比例最高达到60%以上，另外1例中性粒细胞比例最高只达到4%；抗酸结果为（++）的16例病人脑脊液细胞中中性粒细胞比例最高值的中位数（M）53.5%，四分位间距（QR）71%,抗酸结果为（+）的12例患者的脑脊液细胞中中性粒细胞比例最高值的M63%，QR72%。抗酸结果为（±）或（1-）的2例患者，脑脊液细胞学中中性粒细胞比例在整个发病过程中最高为1%（图2）。35例结脑患者其中有8例患者一直随访至痊愈，8例患者抗酸阳性持续时间为病程的第(10~50)d，M为27d（图3）；其他患者正在随访中，最长已随访至病程第d，改良抗酸染色仍阳性。
非结脑组（共15人）中阴性者共14人，占93.33%：其中1人（++）（表1）。
表1：改良抗酸染色的结果
阳性阴性阳性率（%））
3+2+1+±-
结脑组（人）.29
（n=35）
非结脑组（人）-1--.07
（n=15）
表2：胞内抗酸杆菌结果
细胞内抗酸杆菌
+-
结脑组病人(人(%))23(69.70)10(30.30)
结脑组脑脊液(份(%))55(53.40)48(46.60)
对照组病人(人(%))0（0）1（）
对照组脑脊液(份(%))0（0）1（）
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